AAV家族再添一员，AAVv66展现优异的基因递送特性

近年来，AAV作为有效且被证实的基因治疗载体引起了人们的关注。目前这类AAV载体具有稳定、长期的基因表达，广泛的组织倾向性，并表现出较低的致病性。迄今为止，三种血清型衣壳(AAV1、AAV2和AAV9)已获得监管部门批准用于临床。

然而，目前已发现和改造的AAV衣壳不能完全满足临床的需要，针对特定的组织或细胞类型还有待提升。患者可能存在的中和抗体(NAbs)会对载体产生免疫，削弱了治疗效果。为了应对这些缺点或不足，有必要发现和开发性能优异的AAV衣壳。

2020年6月30日，高光坪教授团队在 Nature Communications 杂志发表了一篇名为Structural characterization of anovel human adeno-associated virus capsid with neurotropic properties的研究论文。

这篇文章描述了通过高通量、长时间阅读测序在人类临床样品中鉴定出的新型衣壳。该衣壳被命名为AAVv66，与AAV2具有高度的序列相似性。但与AAV2相比，AAVv66表现出更高的产量，病毒体稳定性和中枢神经系统（CNS）转导能力。

研究团队采用SMRT测序的方法鉴定来自人体组织的全长衣壳序列。从人类手术样品中选取组织并提取DNA进行PCR扩增，对扩增子进行单分子实时（SMRT）测序，并通过BWA-MEM与当代AAV血清型序列，InDelFixer的比对分析所得的读数，以去除与PCR或SMRT测序错误相关的插入/缺失，并重新装配聚集高相似度序列的reads。

在高度丰富的AAV分离株中，确定了一个新的名为AAVv66的变体，尽管与AAV2有98％的序列相似性，但它在功能上与AAV2不同。

将CB6启动子驱动的EGFP表达核包装到AAVv66和AAV2衣壳中。将载体分别注射到小鼠海马右半球。注射后四周，大脑冷冻切片显示，AAVv66所转导的中枢神经细胞比AAV2多13倍，而AAV2倾向于停留在注射部位。

表明AAVv66具有良好的中枢神经系统转导能力。

虽然它们之间的序列具有高度相似性，但结构有着显著的不同。

中心是AAVv66 60-mer结构（灰色）。AAVv66特有的氨基酸残基以绿色突出显示，而与AAV2共有的单个单体的氨基酸残基则以洋红色着色。

除此之外，与AAV2相比，AAVv66具有更高的产率，且具有更高的热稳定性和耐pH性能。且在免疫方面，发现AAVv66不会被AAV2的小鼠预免疫强烈中和，这提示AAVv66血清型可作为再次基因递送的候选载体（即在用rAAV2进行初始治疗后）。相反，用AAVv66免疫小鼠的血清可以在体外阻断AAV2的转导。这一发现表明，AAVv66可能比AAV2具有更好的规避适应性免疫的能力。然而，当使用AAVv66预免疫小鼠血清重复体外NAb实验时，AAV2和AAVv66的转导均被显著抑制，且AAVv66处理小鼠血清对AAVv66的抑制强于AAV2。

因此，AAVv66或可成为新型基因治疗载体，并能够为开发新型AAV衣壳提供新的思路。